親和色譜填料結(jié)構(gòu)

更新時間：2021-12-10 點擊次數(shù)：2582

親和層析是根據(jù)一種生物分子間的特異相互作用來分離物質(zhì)的層析方法，利用待分離物質(zhì)與配體間所具有的特異性親和力來達到分離目的的一類特殊層析技術(shù)。如抗原與抗體、DNA與RNA、酶與底物或抑制物等。

親和色譜填料由基體、配體和間隔臂三部分組成。

微信截圖_20211210165826.png

基體

基體是有一定粒度、一定剛性、多孔的表面有大量可反應基團的固體物質(zhì)，用于支撐間隔臂和配體，在其表面通過反應鍵合上間隔臂和配體后制得親和色譜填料?；w有兩類：一類是有機聚合物，如纖維素、交聯(lián)葡聚糖、交聯(lián)瓊脂糖等；第二類是多孔玻璃和硅膠。

基體應具備的條件：

1.基體是不溶性支持物，具有三維的多孔網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，有足夠大的排阻極限，大分子能不受阻礙地進出內(nèi)孔。

2.基體顆粒應該是均勻的球形并具剛性，粒度均勻，孔徑分布范圍小，機械性能好。

3.基體必須是親水性及惰性的，其骨架與蛋白質(zhì)或其他重要生化物質(zhì)的作用必須極弱，以降低非特異性吸附。

4.基體理化性質(zhì)穩(wěn)定，不會被制備填料時的試劑和流動相破壞。

5.基體必須具有大量表面活性基團。

配體

配體是接到基體或間隔臂上與蛋白質(zhì)分子發(fā)生作用的部分，配體的選擇是親和色譜的關(guān)鍵。配體有兩類：一類叫特異性配體，只對一種蛋白質(zhì)具有結(jié)合能力；另一類叫組特異性配體，也叫通用性配體，對某一類蛋白質(zhì)具有結(jié)合能力。

微信截圖_20211210165905.png

配體應具備的條件：

	配體與待分離的生物分子有特異性結(jié)合。
	配體既要能有效地與生物分子結(jié)合，親和力相當，又能有效地與所吸附的生物分子解離。
	配體既有能特異性地與待純化的蛋白質(zhì)分子相結(jié)合的活性點，又有與基體或間隔臂相偶聯(lián)的化學基團。
	配體自身應具有良好的穩(wěn)定性，能耐受偶聯(lián)以及洗脫時的溫度變化和化學環(huán)境，制得的填料可以多次重復使用。